Использование геномной инструментами для повышения эффективности производства Biologics

Рекомбинантной ДНК технологии преобразования клеток млекопитающих в заводы по белковых терапии. Новые технологии обеспечивают химических инженеров лучшего понимания процесса, а также сами клетки.

С появлением технологии рекомбинантной ДНК более чем два десятилетия назад, нового класса фармацевтических препаратов известен как biologies стали поступать пациенты в них нуждаются. Biologies представляют собой белковые молекулы производится посредством генной инженерии. Хотя первые несколько рекомбинантных белков (человеческий гормон роста и инсулин) были замены для тех же молекул ранее полученных из тканей трупов или животных, технология принесла много новых терапии, которые ранее были недоступны.

Этот новый класс белков терапии изменили пейзаж медицины. Гемофилией, пациенты могут теперь получать фактор VIII без риска заражения заболеваниями крови часто связаны с белками получить из человеческой крови. Эритропоэтин стимулирует образование красных кровяных телец, и резко улучшить качество жизни многих пациентов, в том числе находящимся обычных диализа почки или страдает от тяжелой анемии. Десятки тысяч пациентов воспользовались Авастин, что антитела, которые связываются с фактора роста эндотелия сосудов (VEGF) и душит раковые клетки, отрезав кровоснабжения злокачественной опухоли, и отрицать это кислород и питательные вещества. Другие рекомбинантных терапии лечения заболеваний, начиная от рака и артрита с астмой и бесплодие.

Большинство традиционных препаратов малых молекул с четко определенными химическими структурами, такими как пенициллин и аспирин. В отличие от biologies имеют довольно сложные структуры, которые не так легко отличаются. В дополнение к рекомбинантных терапевтических протеинов, эти biologies включают вакцины, белков, выделенных из тканей, полисахаридов. ДНК, и клетки для терапевтического использования.

Biologies отличаются от традиционных препаратов в том, что их эффективность не полностью определены по своему химическому составу и структуре. Липидного состава и последовательности нуклеиновой кислоты, содержащиеся в вакцине вирус может варьироваться - часто таким образом, что не так легко различимый - при различных производственных процессов работают. Небольшие изменения в процессе условия могут привести к тем же складной белковые молекулы по-разному, придавая различные характеристики на результате наркотиков.

Терапевтические белки производятся методом генной инженерии принимающей млекопитающих ячейки, представляя искусственные последовательности ДНК, кодирующей белок интерес в генетический материал клетки-хозяина, или геном. В рекомбинантные клетки-хозяина, эти молекулы затем превратились в биологически функциональных форм через пост-поступательные изменения - например, химическая модификация белка после начальной стадии биосинтеза. Наиболее распространенные из этих изменений гликозилирование, которое представляет собой процесс ковалентно связи сложных углеводов, чтобы определить места на белок.

В последние два десятилетия, яичников китайского хомячка (СНО) клетка стала доминирующей системы принимающей рекомбинантных терапевтических протеинов. Это господство проистекает из его способности выполнять гликозилирования и других сложных посттрансляционных модификаций, а также из пластика, что позволяет СНО клеток превращаться из минимальных secretors белка в более-плодовитый секреторных клеток. Почти 70% всех рекомбинантных белков терапии, с объемом продаж более $ 30 млрд в год, производится в клетках СНО (I).

Начало третьего десятилетия, технологии рекомбинантной ДНК, сталкивается с новыми проблемами технического процесса. Как патентов на многих терапевтических белков истекает, не фирменные продукты появятся., Новичок производители будут оспорены в соответствии производительность и качество марочных продуктов и технологических процессов, инженеров, связанных с фирменной продукции будут оспорены в целях повышения качества продукции и последовательности, а также процесс надежность. В этой статье рассматривается сложность этих белков терапии и использования геномной технологии в качестве инструмента для решения этих проблем.

Проблемы и возможности в клеточной культуре биопереработки

терапии рекомбинантного белка также предоставили фармацевтической промышленности с огромным ростом в последнее десятилетие. Успех этих препаратов был двигатель для продолжения научных исследований в новых методов лечения, для расширения производственных мощностей, а для движения многие успешную карьеру инженера-химика.

Фармацевтической отрасли биотехнологии в настоящее время вступает в новую эру. С помощью инноваций, новых молекул наркотиков постоянно изучается. Для каждого препарата биологических кандидата. достаточного количества высококачественных белковых молекул должны быть сделаны через инженерные клеток-хозяев, чтобы проверить для клинического потенциала. Так как эти молекулы клинических суда зачастую не производятся в производственные мощности, это также важно, что изделие, изготовленное в стадии судебного разбирательства успешно воспроизводится с одинакового качества в крупномасштабных объекта.

С широкого круга потенциальных кандидатов, подлежащих испытанию, компании есть сильное желание сжать сроки от знака-офф молекулы пройти тестирование на завершение небольшой производственный цикл принятия клинического материала суда. Очевидно, что число новых препаратов, которые могут быть доставлены пациенты, будет зависеть от того, как используются ресурсы в любой проект.

Биопроцесс специалисты сталкиваются с растущим спросом на более быстрое и эффективное развитие эффективный процесс для каждого потенциального продукта. В условиях глобализации производства, производство одного терапевтического молекулы чаще проводятся на нескольких площадках в разных регионах мира. Технологи в настоящее время испытывают дополнительные трудности в обеспечении того, чтобы качество продукта остается неизменным на этих многих местах с различными персонала, культурного, государственного управления и регулирования.

Как патентов во многих терапевтических белков истекает. возможности, открывающиеся для последующей biologies или biosimilars, как не-брендовую генериков биологических, упоминаемые в США и Европейского союза, соответственно. Эти условия воплощают о том, что biologies трудно скопировать, и, хотя последующие продукты могут быть похожи на оригинал, они не могут быть точно так же. Из-за высокой молекулярной сложность этих терапии, они чувствительны к различиям в клеточной линии, производства, а также окружающей среды.

Хотя последующие biologies до сих пор не одобрен для использования продуктами и лекарствами США (FDA). они были доступны и в других частях мира на протяжении нескольких лет. Рынок для последующих дополнений. , а также количество таких наркотиков, растет, и некоторые американские фармацевтические компании, входящие в область.

В отличие от последствий генериков были на рынках традиционных препаратов, введение последующей biologies не может привести к стремительному падению цен на их фирменных аналогов. Однако, конкуренция, безусловно, усилит давление на продукцию марки продемонстрировать высокое качество и последовательность. Это может быть достигнуто только за счет более надежной-процессов.

Из-за сложности продукта и процесса, риск отклонения качества продукта не является незначительным. Производители последующих дополнений сталкиваются с трудностями в разработке процессов для создания этих сложных биологических молекул. Мало информации о любой процесс или продукт будет добровольно по создатель запатентованный продукт, но biosimilar молекулы должны быть сделаны таким образом, что гарантирует, что будут проводить встречи каждые химических, физических и биологических спецификации (например распределение гликанов на молекулу).

Таким образом, в новую эру терапевтического biologies, биотехнологических специалистов для марочных и последующей biologies в равной степени сталкиваются с проблемами поднять планку надежности процесса и качества продукции. Применение принципов качества проектирования (QBD) и промышленных аналитических технологий (PAT) может помочь в достижении этих целей.

Завод производящих продукт клетки. Отображение физиологических особенностей и состояния производственного оборудования является лучшим способом понять условия, порождает большое количество продукты высочайшего качества. Таким образом, существует острая необходимость в PAT, что обеспечивает наибольшую биологического понимания процесса. При таком понимании, вмешательство схемы для устранения каких-либо отклонений от оптимального могут быть разработаны.

ДНК-микрочипов и других "OMIC" технологий

В последние несколько лет, различные OMIC-инструменты стали доступны в более-доступным ценам для обеспечения такой биологического понимания. Эти инструменты были разработаны на основе целостного, масштабного исследования геномов (геномика), белки (протеомика), метаболиты (метаболомики), и мРНК производства клеток (транскриптомику), среди других.

Одним из таких инструментов является ДНК-микрочипов для съемки транскриптом, т. е. совокупность всех молекул мРНК (или стенограммы), полученного в популяции клеток. Microarray анализ особенно мощным, поскольку он позволяет всем транскриптом. , состоящий из стенограммы до 40,000 генов, который будет захвачен с помощью одного устройства. Эти микрочипы являются стеклянные слайды, на которой десятки тысяч одноцепочечных ДНК зондов были сданы на хранение. Деятельности каждого гена, для которого существует соответствующий настоящему зонда на поверхности могут быть обнаружены и количественно.

Многие исследователи использовали OMIC-инструменты, особенно микрочипов ДНК, чтобы изучить особенности высокая производительность рекомбинантных клеток млекопитающих. Эти средства были использованы для обследования динамики экспрессии генов в клетках с различной производительности, а также для изучения технологических условий, которые повышают производительность труда в клетках. От такого сравнительного исследования, в последние два-три года, эскизы комплекса черта hyperproductivity начали появляться. Клетки приносит высокую концентрацию продукта (титр) имеют профили экспрессии генов, связанных с ростом и гибели клеток, которые отличаются от клеток, уступая нижней титров (6-13). Это, возможно, позволяет им дольше оставаться жизнеспособными в конце культивирования при концентрации клеток является самым высоким, что позволяет более молекул продукта накапливаться.

Можно было бы ожидать клеток с высокой производительностью, также требуют более высокого уровня мРНК белок. Как правило, это правильно клеток при сравнении со средними по продуктивности с низкой продуктивности. Тем не менее, это не справедливо и в отношении клеток, продуктивность приближаются к высоко специализированные клетки, которые производят и выделяют белки в огромных количествах, например, клетки печени и антитело-секретирующих плазматических клеток (которые знаю как профессиональные secretors).

Процесса производства белка скоординированной работы многих органелл клетки. Образования пептидной связи и складывающиеся в процессе синтеза белка очень энергоемкие. Изготовление 1 пептидной связи требуется по меньшей мере три молекулярные эквиваленты аденозинтрифосфат (АТФ), а при окислении одной молекулы глюкозы до воды и СО2 производит только около 30 молекул АТФ. Высокая производитель, таким образом, вероятно, имеют более высокие энергии генерирующих мощностей, а также расширение механизмов, участвующих в фолдинга белков и секреции. Уровня экспрессии многих генов, вовлеченных в эти процессы выше в высокий-продуцирующие клетки или под высоким производству условия (14).

То, что не может быть очевидным является то, что высокая производитель не только высокоразвитой секреторной пути, но и активный маршрут утилизации мембраны. В конце секреторных пути, белковых молекул на экспорт осуществляются в качестве груза на мелкие пузырьки мембраны и отправлен плазмалеммы на поверхности клетки, а оттуда они будут освобождены в среду клеточной культуры. Пузырек мембраны затем сливаются с плазматической мембране. Высокопроизводительные клеток, а следовательно, нуждаются в очень активной пузыря процесса перевозок. Однако, для гомеостаза поверхности мембраны клетки, пузырек движения должна быть двунаправленной. Таким образом, пузырь-системой рециркуляции мембраны, как представляется, более активны в высокое-продуцирующих клеток, чем в нижней-продуцирующих клеток.

ДНК-микрочипов создает детальный портрет транскриптом, вроде отпечатков пальцев, которые могут выявить тонкие изменения процесса очень подробно. В производственном процессе, некоторых компонентов среды, таких как животное сыворотке или соевый гидролизат) не определена. Различные много из этих компонентов не может дать достоверных результатов, поскольку их качество трудно определить и оценить. Когда более чем 100 микрочипов зондирования различных условиях культуры, были объединены и проанализированы их сходства, удивительно общей картины гена выражения видно из производственного цикла, которые используют ту же партию сырья.

В другом исследовании (15). микрочипов были использованы для характеристики ЧО клетки различных линий. Хотя ячейки образцов охватывает широкий спектр условий культивирования клетки сохранили молекулярной подписи родительских происхождения и transcriptomes из клеток, взятых из той же родительской линии клеток объединить вместе. Эта способность правильно группы клеток из одной линии, даже после воздействия на широкий спектр препаратов или методов отбора, показывает потенциал ДНК-микрочипов в дактилоскопии.

Потенциал анализ микрочипов ДНК судебно инструмент в процессе расследования или контроля качества легко оценить. Его использование в качестве транспортного средства открытия одинаково узнаваемы. С помощью таких масштабных гена выражения анализы, следователи нашли среднего добавки, которые повышают желаемые характеристики процесса. Кроме того, транскриптом анализ был применен для характеристики процессов клеточной культуры, в том числе партии и партии надоело культур (16, 17). Анализ ДНК микрочипов вызвали cellengineering стратегий, которые привели к повышению производительности труда и улучшенными характеристиками роста. С помощью таких исследований, ученые также обнаружили новый антиапоптотического генов (т.е. генов, которые не позволяют запрограммированной смерти или апоптоза). Это привело к улучшению процессов надоело партии, более надежные клеточные линии, и выше продукта титры, сохраняя при этом желательно профилей гликана.

Другие возможности применения анализа ДНК микрочипов включить профилирование выражение отпечатков пальцев для процесса расширения масштабов и оценки изменчивости. Есть нет надежных методов для прогнозирования роста характеристики и производственные возможности клеточных клонов во время масштабов деятельности. Клонов отобраны и характерны для клинической производства, не может вести себя так же в крупных биореакторы, несмотря на, казалось бы, идентичные параметры процесса. Более глубокое понимание физиологии клетки в этих стадиях развития может помочь в разрешении этих трудностей. Кроме того, производство работает редко приводят к идентичным качества продукции и титров. Когда процесс управления и контроля не в состоянии выявить источник отклонения, транскриптом профили могут предоставить диагностическую информацию.

На заре данных богатых эпохи

Несмотря на свою универсальность, микрочипов ДНК только показывает активность генов, для которых зонд присутствует. Для человека и мышиных клеток, практически во всех известных генов может быть зондируемой, потому что их геноме доступен в цифровом виде. Тем не менее, последовательности имеются лишь небольшая часть клетки СНО, по оценкам, 30 000 генов. Нет, финансируемых государством секвенирования генома проект был запланирован на китайских хомяков. Хотя во многих других организмов, медицинского, сельскохозяйственного и экологического значения входят в список животных, чтобы быть последовательными, китайского хомяка не является, хотя ячейки СНО является самой распространенной клетки-хозяина для производства белка терапии.

В последние несколько лет некоторые компании самостоятельно приступили к усилиям, направленным на секвенирования генов СНО клетки. Кроме того, общество AlChE по биологической инженерии (SBE) создала консорциум для сотовых СНО Genomics. объединения ресурсов участников консорциума по разработке инструментов для генома, что, вероятно, наиболее экономически важных промышленных организма (I). Эти усилия сосредоточены на последовательности стенограмм, как правило, называют выразил последовательность метки (ЭТ), которая позволила создать ДНК-микрочипов.

Такая запись основе последовательности имеет ограниченную власть открытия из-за характера транскриптом млекопитающих. Некоторые гены чрезвычайно активны и трансляции на очень высоком уровне, эти обильные гены мало, но и десятки тысяч экземпляров их стенограммы присутствует в каждой клетке. Некоторые гены умеренного как в их количестве и на уровне каждого разбирательства. Наконец, Есть много редких генов лишь очень небольшое число запись копий на клетку.

Когда последовательность стенограмм, 1 неизбежно последовательности обильные них повторно, и обнаруживает редкие гены редко. Секвенирование большое количество редких стенограммы, следовательно, требует мобилизации значительных ресурсов.

До недавнего времени все последовательности EST занятых традиционной цепочке, заканчивающийся Сэнгер в процесс, который изменил лицо молекулярной биологии 30 лет назад (I8-20). В этом методе, фермент ДНК-полимераза позволяет правильно базы (т.е. база, которая является дополнением к шаблону нить), которые будут добавлены к удлинения нити ДНК. Например, если следующий базы на шаблоне нить аденозина (A), получим удлинения нити тимидина (T).

Удачный часть этого метода, однако, является использование цепной терминатора аналогов, которые химически аналогичные правильной базы, но завершить удлинение реакции, так как следующий база не может быть ковалентно связаны с ним. Это позволяет удлинение реакция должна быть прекращена случайно и преждевременно. Называя четыре базы аналогов с различными флуоресцентными красителями, последний опорный пункт каждого прекращены досрочно цепи ДНК может быть признано его флуоресценции.

Концентрации 4 аналогов отрегулирована таким образом, что несколько молекул ДНК прекращается в каждой базе. Полученный продукт представляет собой смесь молекул ДНК, длина которых изменяются с шагом в 1 базу. Капиллярного электрофореза затем используется для разделения этой смеси на одной базе резолюции. Помимо критической длины, больше молекул не может быть уважаемым. В целом, этот метод генерирует 700 - в 1000-базовый длинные последовательности (так называемые чтение).

Для того, чтобы начать шаблон чистой, а не смесь молекул ДНК, каждый EST клонировании, а затем производится из ячейки кишечной палочки используя крайне утомительным и трудоемким процессом. Как правило, каждый EST секвенирована с обоих концов, и несколько из экологически безопасных технологий и того же гена последовательности, чтобы получить "консенсус" последовательности. С считывает информацию с противоположных концов, не могут встретиться в середине, даже консенсуса нескольких ЭБТ того же гена, не может обеспечить полной длины охвата всей стенограммы.

В последние два года достигнут существенный прогресс в технологии секвенирования ДНК были сделаны. Стоимость секвенирования для каждой базы база сократилась на целых три порядка - от долей копейки на базе метода Сэнгер, на пару центов за тысячу основы для так называемой последовательности следующего поколения технологии (21).

Преобладающих в настоящее время методы фрагмента молекулы ДНК, случайно, не прибегая к клонированию. 3 приведены два из этих новых методологий. Главной особенностью этих методов является массовым и параллельно усиления (копирование) для каждого фрагмента ДНК, индивидуально, создавая до миллионов кластеров или колонии молекулы ДНК той же последовательности.

В методе секвенирования ДНК, разработанный 454 Life Sciences (отображается слева от рис. 3), каждый фрагмент будет обездвижен на шарик, содержащиеся в капли эмульсии масло-вода, заставив всех копий этого фрагмента быть поставлены на прикол в тот же шарик а также (22). Последовательности Illumina Solexa технологии (рис. 3, справа) останавливает фрагмента на твердой поверхности и границы копии фрагмента в том же регионе, формирование кластера одинаковых последовательностей на поверхности (23). Эти гениальные подходы позволяют большого количества одинаковых последовательностей должны быть изолированы таким образом, чтобы свет, излучаемый из реакций в эти кластеры можно обнаружить с помощью одного датчика (например, прибор с зарядовой связью (ПЗС) камеры). Это резко снижает стоимость секвенирования по сравнению с традиционным методом Сэнгер, который требует датчика в конце каждого электрофоретической капилляра.

Оба метода, то использовать базовый на базе синтеза. 454 технология работает путем последовательного добавления одной из четырех нуклеотидов, а фотоны излучаются при включении базы. Метод Illumina Solexa использует флуоресцентно меченых нуклеотидов, которые также являются обратимыми терминаторов. Одна базовая включены и проанализированы в то время, поскольку дальнейшее удлинение цепи не происходит. Когда все кластеры были проанализированы и база определяется для каждой колонии, флуорофоров являются скола часто "и заканчивающийся базы будут активированы, позволяющие еще один раунд нуклеотидов регистрации.

Недостатком этого поколения новых технологий секвенирования является их зависимость от полной синхронизации в серийном реакций. Считывает получить относительно короткие по сравнению с теми из последовательности Сэнгер. Тем не менее, этот недостаток с лихвой компенсируется возможностью методы "для массивно параллельных чтения миллионов последовательностей на высоких скоростях и сравнительно низких затратах. Их огромные возможности параллельного секвенирования позволяют до миллионов фрагментов большом количестве видов мРНК (например, справку за рекомбинантных протеинов), которые будут читать за один проход, и одной читает быть получены тысячи редких генов. Такой динамический диапазон в области секвенирования мероприятий способствовало изучение этих технологий для оценки уровня экспрессии каждого гена в целом транскриптом (24, 25).

Новые технологии секвенирования меняются перспективы применения геномных инструментов млекопитающих биотехнологической клетки. На сегодняшний день, не финансируемых государством ДНК или EST последовательности проект был инициирован в клетках СНО. Некоторые фармацевтические компании взяли на себя в доме-проектов EST последовательности, однако большинство исследователей не имеют доступа к геномной инструменты для китайского хомячка.

Эти новые технологии секвенирования привели секвенирование генома в пределах досягаемости, даже при отсутствии государственного финансирования. Инструменты, построенных по последовательности генома позволит повысить эффективность контроля в создании клетка и в обеспечении качества продукции. Последовательность сегментов, которые позволяют генов в ответ на регулирование (так называемый промоутеров и усилители) будет открыт, значительно улучшая способность генов быть изменены в результате мутации, удаление или усиления, это может быть возможным манипулировать генами, в динамично в связи с природоохранными или физиологические сигналы прошиты "желаемое" генов с помощью соответствующих контролирующих элементов.

Секвенирование генома позволит также изучение эпигенетических изменений - то есть, изменения, в результате которых глушителей или активации генов, не вызывая изменения в последовательности ДНК. Эпигенетические модификации играют ключевую роль в регуляции дифференцировки и развития как в естественных условиях и в области стволовых клеток в культуре. С колоссальным изменениям в экспрессии генов, которые сопровождают создание высокой производитель, вполне вероятно, что эпигенетические события также играют ключевую роль в трансформации в высокой производителей.

Потоке данных, которые будут рассматриваться в ближайшем будущем не придет из последовательности технологий в одиночку. Намного больше информации, могут быть получены от генома инструменты, построенные по исходной информации последовательности. Анализ сотен транскриптом профили могут выявить скрытые закономерности в данных и обеспечить огромные возможности для инженера клеток и придания им желаемой черты. Учитывая огромный объем данных, генерируемых процесса в типичном заводе модем, можно представить себе безграничные перспективы для продвижения процесса и инновационного процесса, когда эта информация сочетается с клеточной физиологии в виде транскриптом, протеома и metabolome данных.

Заключительное слово

С момента введения млекопитающих-cellbased рекомбинантных белков в качестве терапии, биотехнологов освоили искусство изготовления клеток крайне производственных заводов для этих лекарств. В последние несколько лет, введение геномной инструментов, особенно микрочипов ДНК, чтобы биотехнологических исследований позволил нам лучше понять процесс, а также клеток себя. Они обеспечивают понимание сложности высокую производительность и высокое качество продукции. Масштабный сравнительного анализа на транскриптом и протеома уровнях позволяют предположить, что высокая производительность часто результаты небольшие изменения в широкий спектр клеточных функций, в частности белка секреции, сотовые контроля роста и производства энергии.

Благодаря технологиям секвенирования ДНК решений гигантские шаги вперед, геномные технологии станут еще более доступными для биотехнологических сообщества. Перспектива секвенирования генома китайского хомяка приведет к эпоху растущего информация о наиболее важных лошадкой биотехнологической отрасли, CHO клетки - проложив тем самым путь для умнее процессов, линии дизайнер клетки, и высокое качество продукта.

ЛИТЕРАТУРА

1. Jayapal, К. П. и др. ", терапии рекомбинантного белка из клетки СНО - 20 лет и считать," Хим. Eng. "Прогресс". 103 (10), с. 40-47 (октябрь 2007).

2. Ellgaard, Л. и А. Хелениус, "Контроль качества в эндоплазматической сети," Nat. Преподобный Мой сотовый биологии, 4 (3), с. 181-191 (2003).

3. Ео К., "Эль Аль", "Изменчивость транспорта Цены секреторных Гликопротеины через эндоплазматического ретикулума и Гольджи в клетках гепатомы человека," J. биологии. Chem., 260, с. 7896-7902 (1985).

4. Yamane-Ohnuki Н., "Эль Аль", "Создание FUT8 Knockout яичников китайского хомячка клетки: Идеальный клетки-хозяина линии для производства полностью Defucosylated Антитела с расширенными AntibodyDependent клеточной цитотоксичности," Biotechnoi Bioeng .. 87 (5), с. 614-22 (2004).

5. Вурм, Ф. М.. "Производство рекомбинантных белков терапии в культивируемые клетки млекопитающего", Nat Biotech. 22 (1 +1), с. 1 393 - 1 398 (2004).

6. Khoo, SH, переворот ", генома транскрипции Анализ производителей и ненасилия Производитель НСУ миеломы клеточных линий". Biotechnoi Аппи. Biochem., 47 (часть 2), с. 85-95 (2007).

7. Сет, Г. и др., "Молекулярная Портрет Высокая производительность в реко-7. Binant НСУ клетки", Biotechnoi. Bioeng., 97 (4), с. 933-95 1 (2007).

8. Баик, JY и др., "Начальное Транскриптом Proteorne и анализ 8. Низкой культуры температурного выражение в СНО клеток, продуцирующих эритропоэтин", Biotechnoi. Bioeng., 93 (2). с. 361-371 (2006).

9. Nissom, ТЧ, и др., "Транскриптом и Protcome Профилирование до 9. Понимании биологии клетки высокой производительности СНО," МВД. Biotechnoi, 34 (2), с. 125-140 (2006).

10. Дулан, П. и др. ", транскрипционный анализ профиля экспрессии генов 10. Изменения в ПАСЕ-СНО трансфекции клеток линии DUKX секреции высокий уровень rhBMP-2", МВД. Biotechnoi, 39 (3), с. 187-199 (2008).

11 Trummer Е., и др., "транскрипции Профилирование Phenotypi-11. Калли Различные Epo-Fc выражая СНО клонов межвидовых Microarray анализ", J. Biotechnoi. 3 (7), с. 924-937 (2008).

12. Yee, J. C, и др., "Геномика и протеомных исследований СНО и Гибридома клеток под бутират натрия обращения", Biotechnoi. Bioeng .. 99 (5), стр. 1. 186-1204 (2008).

13. Yee, J. C, и др. в. "Сравнительный анализ Транскриптом обнародует рекомбинантных генов, влияющих на производительность белка у млекопитающих Ceils", Biotechnoi Bioeng., 102 (I), с. 246-263 (2009).

14. Dinnis DM и др., "Функциональный анализ Proteomic GS-НСУ мышей линии клеток миеломы с переменным рекомбинантных моноклональных антител Рейтинг", Biotechnoi Bioeng., 94 (5), с. 830-841 (2006).

15. Kantardjieff, "и др.." Разработка геномной платформы для китайского хомячка клетки яичников, "Биотехнология-Авансы, (2009, в печати).

16. Вонг, D. C, и др., "Профилирование транскрипции апоптоза в пакетном режиме и ФРС-Batch культур СНО Cell," Biotechnoi Bioeng., 94 (2), с. 373-382 (2006).

17. Крамп, Б. и др. ", Транскриптом и Proteorne Анализ антител Производство миеломы мыши НСУ клеток, культивируемых на различных плотностей перфузии ячейки в культуре", Biotechnoi Аппи Biochem., 50 (часть 3), с. 133-141 (2008) .

18. Сэнгер, Ф. и др., "Секвенирование ДНК с цепью, заканчивающийся ингибиторы," Proc. Натл. Акад. Наука США. 74 (12), с. 5463-5467 (1 977).

19. Свердлов, Х. и др. в. ", Капиллярного электрофореза геля для секвенирования ДНК. Лазерно-индуцированной флуоресценции обнаружения с Оболочка потока кювет," J. Chwmatogr., 516 (1), с. 61-67 (1990).

20. Hunkapiller, Т. и др., "масштабное и автоматизированного определения последовательности ДНК," Наука. 254 (5028), с. 59-67 (1991).

21. Хадсон, Е. М. последовательности геномной Прорывы для экологии и эволюционной биологии, "Молекулярная ресурсов экологии. 8, с. 3-1 +7 (2008).

22. Маргулиес. М., и др.. ", Секвенирование генома в Microfabricated реакторов высокой плотности пл," Природа. 437 (7057), с. 376-380 (2005).

23. Bentley, DR и др.., "Точная полного секвенирования генома человека, используя обратимое Терминатор химии" Природа. 456 (7218), с. 53-59 (2008).

24. Мортазави, А. и др., "Отображение и количественного млекопитающих Transcriptomes РНК-Seq", Nat. Методы, 5 (7), с. 621-628 (2008).

25. Тан, Ф. и др. в ", MRN-Seq Whote-Transcriptorne Анализ одной ячейке", Nat. Методы, 6 (5), с. 377-382 (2009).

Нитья М. JACOB

Wei-ШОУ HU

Университет Миннесота

БЕРНАР LIATWEN LOO

МИРАНДА YAP

Биопереработки технологический институт * STAR

Нитья М. Яков докторант кафедры химической технологии и материаловедения СО РАН в Univ. Миннесота (421 Washington Ave. SE., Minneapolis, MN 55455, телефон: (612) 625-3051, E-почта: <a href="mailto:jacob883@umn.edu"> jacob883@umn.edu </ >), где ее исследования направлены на млекопитающих транскриптомику ячейки и протеомики. Она получила ее степень бакалавра в области химического машиностроения в Индийском технологическом институте в Дели. Она является членом Общества по биологической инженерии.

Wei-ШОУ HU является почетным профессором Университета Мак-Найт на факультете химической технологии и материаловедения СО РАН в Univ. Миннесота (Телефон: (612) 625-0546, факс: (612) 626-7246, E-почты. <a href="mailto:acre@cems.umn.edu"> acre@cems.umn.edu < />). Его исследования в настоящее время сосредоточена на широкий круг инженерных культуре клеток, особенно выяснение генов черта отношений через транскриптом / протеома анализа и метаболизм клеток млекопитающих. Он имеет степень бакалавра в области сельскохозяйственной химии из Национального Тайваньского университет, С. М. и доктора биохимической инженерии в Массачусетском технологическом институте. Он является членом Аиш и в настоящее время входит в состав наблюдательного совета Общества по биологической инженерии.

МИРАНДА С. YAP является исполнительным директором Bioprocesslng-технологический институт в Сингапуре (Тел.: 65-6407-0880; Электронная почта: <a href="mailto:miranda_yap@bti.a-star.edu.sg"> miranda_yap @ БТИ . star.edu.sg-</ A>) и профессор в области химической и биомолекулярных Технический отдел Национального Univ. Сингапура. Она сыграла ключевую роль в развитии биотехнологии в Сингапуре, и сыграл важную роль в создании биотехнологических исследований и производства потенциал. Она иностранных сотрудник американской Национальной инженерной академии, лауреат 2009 Наука президента и технологии медаль (Сингапур). Она имеет степень бакалавра в области прикладной химии из Национального Univ. Сингапур, MS в биохимической инженерии из Univ. Колледжа в Лондоне, а также докторскую степень в области химического машиностроения Univ. Торонто. Она также является членом наблюдательного совета Общества по биологической инженерии.